同学们大家好！过去构建基因表达载体常见的考察方向有两个。
·一个就是限制媒的选择，就是如何把载体和目的精分别没切，然后拼接到一起，这样保证有目的精能够正确的转录和翻译。
·还有会考察引物的选择，比如如何把目的精扩增出来，而且有的时候由于目的精两侧没有合适的煤气味点，还需要在引物上添加煤气味点。
这两年北京开始喜欢考察如何根据需要来选择启动子。启动子有多种类型，组成型启动子就是什么细胞都表达的，还有诱导型启动子就是需要添加诱导物的，还有强启动子组织特异性启动子。
因为有的基因并不需要在所有细胞中表达，比如只需要在乳腺细胞中表达的可以选择乳腺细胞特异性启动子，只需要在脑组织中表达的就可以选择脑组织特异性启动子。另外还需要选择跟启动子连接的目的基因，有的时候还需要构建融合基因，而且通常需要同时构建多个表达代替来实现不同的目的。
今天的北京高考题考察的就是启动子和目的基因的选择来构建所需要的表达代替。这个题的目的是检测水体污染，因为水中的雌激素类物质会导致鱼类的性别异常，所以科学家把荧光蛋白基因导入了斑马鱼。这种鱼釉体是透明的，可以通过荧光强度来检测水中的雌激素类物质的含量。
括号一将表达代替导入斑马鱼受精卵的最佳方式就是显微注射。为了监测这个医物质，研究人员设计了两种方案，分别使用了两种诱导型启动子。
·一种是叫压一，它可以被一物质也就是雌激素类物质及它的受体复合物所激活。
·一种是酵母来源的 u s启动子，它可以被 g a l四所激活。
第二个方案是首先由衣物质和它的受体复合物激活一二一启动子，启动 g a l四的表达，然后再由产生的 g a l四来激活 u a s启动子，启动荧光蛋白基因的表达。
可以看出来第二种方案有很明显的有一种放大的作用，就是把环境中微量的异物质先转变成g a l四，然后g a l四的含量再转变成荧光的强度。所以这个方案二的主要优势就是监测的灵敏度更高，所以被用于制备监测鱼，它的代号是 m o。
一般转基因生物都会带来一些生活安全问题，所以通常都要获得这种不育的个体。但是不育的个体就意味着没办法通过自身的繁殖来产生更多的同种鱼作为监测材料，所以需要清本不断的杂交来获得。
前面导入方案二的这些经构建的个体是 m o，现在还需要构建另外一个清本x，通过两个清本的杂交获得这种不育的监测鱼。题目让我们来选择相应的启动词和目的基因。
先来看一下要选择什么样的目的基因。因为这个，这个氢本的目的就是要使这个要使得他的子代不愈，所以一看应该是选择这个d仅导致生殖细胞凋亡的这个基因，b级基因。
然后再来看要选择什么样的启动子，q4它是使基因仅在机器机细胞中表达的启动子，那跟这个题没什么关系，首先排除它。
然后再来看这个圈三，圈三是使晶晶在生殖细胞表达的启动子，到底选不选这个圈三？这个选项其实是很多同学所误选，但是大家想一下这个功能就是说井在生殖细胞表达的这个功能是不是这个d目的基因它已经包含了，因为这目的精它就是使生殖细胞凋亡的，所以这个圈三其实已经重复了，所以也把它排除掉。
接下来就只剩下一和二到底选谁？如果选圈一，这个一二一，它是一个雌激素诱导性启动子。我们想一想这个青本s它是能产生雌激素的，那么雌激素它启动了下游基因的表达，也就是这个d g基因的表达以后，那青本x它自己的生殖细胞就凋亡了，无法产生后代，那么就不对了，所以就应该选这个char u s。
这样的话，这个当这个青本m m o和这个x杂交产生了这个s m以后，这个幼体的 s m环境中的这个雌激素类物质可以激活它的e r e 的启动，然后再诱导这个g a l四蛋白的表达，然后g a l四再结合u a s诱导这个荧光蛋白晶的表达，从而进行环境的监测。
而这个成体的 s m，这个 u s结合了这个g a l四结合了这个 u a s以后，它诱导了这个生殖细胞凋亡金的表达，从而造成不育，也就是这个括号四的问题，就是这个成体 s m自身产生了这个雌激素与树体结合以后，他是如何造成不育的。
然后括号五问的是这种环境监测于 s m让他不育的目到底是什么？其实就是为了避免转经斑马鱼逃逸带来的生活安全问题。因为这种金工程鱼，他如果是和自然界的鱼杂交以后，那么这些基因就会传播出去，所以必须得让他不育。
好了，那么今天的分享就到这里，接下来我们还会再分享几个类似的构建经表达载体的题目。那么欢迎大家持续关注我，并且把视频推荐给身边有需要的朋友，大家再见吧。
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